Духовске задушнице обиљежавају се у суботу пред Тројице
Вјерници Српске православне цркве и други православни хришћани духовске задушнице посвећују умрлим прецима и посјећују гробове, пале свијеће и служе помене.
На дан када се обиљежавају ове задушнице, у црквама се служи света литургија и парастос, чита молитва за све умрле у свим временима.
На гробљима се пале свијеће, а свештеници дају појединачне парастосе, молећи Господа да буде милостив према покојницима.
По обичајном календару, излазак на гробља током задушница сматра се обавезом сродника, а ако то није могуће, свијећа се може запалити и у цркви.
Духовске задушнице помињу се већ од 12. вијека у црквеним књигама.
Умјесто уобичајеног изношења хране, Црква позива на молитву и даривање сиромашних, болесних и прогнаних.
Задушнице се обиљежавају четири пута годишње и увијек су суботом.
Духовске задушнице су посљедње задушнице до октобра када ће се 5. октобра обиљежити Михољске задушнице, а Митровске, односно јесење задушнице, биће обиљежене 2. новембра, у суботу уочи Митровдана, празника посвећеног Светом Димитрију.
У недјељу, 8. јуна, православни вјерници обиљежавају празник Свете Тројице или Духове, који се обиљежава 50. дана послије Васкрса и десетог послије Спасовдана.
Овај празник се још назива Педесетница и Силазак Светог Духа на Апостоле.